原官網的常見問題都先搬到這分類底下

回覆:
cAMP-Glo Max assay是cAMP-Glo assay 的改良版，cAMP-Glo Max assay中的cAMP-Glo ONE buffer具有lysis及cAMP detection的功能，操作步驟比cAMP-Glo assay少，當然也較省時。另外，換算V1501在96 well的話約100個assay數。

回覆:
產品Protocol中提到使用在細胞樣本上的做法，但相似的產品GSH-Glo™ Glutathione Assay可用在Cell, tissue, whole blood, erythrocyte上。

回覆:
此項產品的protein digestion pH值範圍落在5.2~5.4哦。

回覆:
Pepsin 的酵素作用pH值為1.0-4.0，在pH為1.5最大的活性是90%，而在pH為4.5最大活性35% ，因此特定切位Phe and Leu在pH為1.0效率最好，大於pH2.0效率就會開始下降，大於pH6.0，便會造成酵素不可逆的失活特性。

回覆:
此產品應避免多次冷凍解凍及頻繁更換保存的溫度，存放在-20℃可以穩定保存2年(經原廠測試冷凍解凍7次，活性降低10 ﹪)，也能在-70℃保存數年，因此，冷凍解凍一次，對於產品的活性與效能是不會有影響的。

只能使用protocol建議的Synergi™ Hydro-RP column (Phenomenex Cat.# OOF-4375-EO)作分析嗎?

回覆:
沒有錯,因為原廠嘗試過很多種C18 column, 只有這支Synergi™ Hydro-RP column適用此套kit, 如要是其他column, 則需自行調整條件哦。

回覆:
此產品建議回溶Trypsin濃度到0.1 mg/ml-0.5mg/ml
(e.g.: 20μg加200μl Buffer or 20μg加40μl Buffer).

Promega提供的vector的promoter只有CMV,如果是其他種promoter,有無客製化呢?

回覆:
目前無提供客製化,必須依照promega licensing webpage自行合成哦。

RNA用傳統法抽，無論有無gDNA汙染，都會用Dnase I treatment，但treat完後跑膠會有smear問題，想問後續加Rnase inhibitor是否會互相干擾? 樣本是藻類，下游要做NGS，不翻cDNA，要做RNA-seq.

回覆:
protocol有建議，若是用傳統方法抽RNA，則可以省略RQ1的第三與第四步驟，也就是不需加stop buffer以及加熱去inactiveDNase，因為reation buffer有鹽類，加上前處理是用Trizol傳統方法抽取RNA，若做步驟3的話，isopropanol可能會和Kit內的stop buffer作用，在膠上就會有smear。
若下游是要做RT(需看使用的廠牌)有denature at 65 degrees, 那它就會inactivate DNase! 同時也有會在DNase treatment 後再做ㄧ步re-purification step.

與ABI的qPCR master mix相比，promega Ct value提早1-1.5個cycle，且螢光有偏弱的現象，因樣本有做三重複，可看出SYBER很穩定，想問如何調整?

回覆:
根據protocol建議，ABI7500/7500FAST是不需要加CXR Dye，因為A6001本身含有low level CXR Dye，所以在上述的儀器中是不需要外加的，因為客戶自行外加，CXR濃度過高會導致Ct值延後，因此建議客戶不要外加，才不會影響Ct值。若今天客戶是使用須外加CXR Dye的儀器(可看protocol有儀器列表)且有Ct延後的問題，可以建議降低CXR濃度，原本是1X的用量，可降低成0.5X試試看，降低CXR Dye濃度，可以讓Ct值提早，但是標準偏差會變大，標準偏差越大，要分辨目標template濃度間的微小區別的可信度就越低。
A6001裡面有一支單獨裝的 100X CXR，是針對在需要高濃度reference dye的儀器上進行檢測時，需另外加入一定體積的染料，用於增加精準度以及校正孔與孔間的螢光訊號誤差，方便客戶針對不同型號螢光定量儀實驗時選擇對應濃度使用。 註:標準偏差是偏差的平方根，是最常用的精確度計量方法，如果許多數據點都靠近平均值，那麼標準偏差就小；如果許多數據點都遠離平均值，則標準偏差就大。

回覆:

產品的差異是他們各自結合的序列不同:
1.Oligo(dT) primer: Amplify only mRNAs containing a poly(A) tail, since that is where the primer binds to promote reverse transcription.
2.Random Primer:是最普遍用來使用的，Amplify most RNA species, including degraded RNA and viral genomes.
3.Gene Specific Primer: Binding target sequences contained within a single mRNA of interest and only that region is amplified; these primers are often used for 1-step RT-qPCR reactions

多數使用者也會oligo(dT)以及random primer結合一起用，這樣可以有效的得到全部RNA資訊。
A2790(mix+ oligo(dT))以及A2800(mix+ random primers)兩個做50/50 的mix來使用，也就是Oligo(dT)+random primers 的50/50mixture for RT後，其qPCR性能無顯著差異。

備註:
A2790(mix+ oligo(dT)):可有效合成第一股cDNA，主要藉由annealing to 3'end of any poly(A) molecule. 不管是Total RNA or mRNA都可以使用。
A2800(mix+ random primers): Can be used to prime first-strand cDNA synthesis from all RNA molecules, including those that do not possess a poly(A)+ tail and RNA isolated from prokaryotic sources.

回覆:

Reaction buffer(5X)加入DTT和dH20，可配成2X Kinase Buffer<1ml of 2X Kinase Buffer=400μl Reaction Buffer, 1μl DTT, and 599μl of dH20>。   
Kinase Buffer是用來作為enzyme, substrate, ATP 及inhibitors稀釋緩衝液，來進行酵素反應。DTT的作用是為了維持酵素催化的活性，防止酵素上的cysteine residues形成雙硫鍵，以保留與inhibitor反應的位點。

請問是否有手動KIT可以從buffy coat抽取RNA?

回覆:
原廠有app note可以參考，從第四部銜接Z6011(Tissue protocol-non fibrous)的步驟 ，但必需自備isopropanol 酒精即可。

回覆:
LDH的濃度為 800U/ml
其配方是: 9% (v/v) Triton® X-100; 原廠可單賣Cat#G1821

Reaction buffer及DTT的用法跟作用?

回覆:

Reaction buffer(5X)加入DTT和dH20，可配成2X Kinase Buffer<1ml of 2X Kinase Buffer=400μl Reaction Buffer, 1μl DTT, and 599μl of dH20>。   Kinase Buffer是用來作為enzyme, substrate, ATP 及inhibitors稀釋緩衝液，來進行酵素反應。DTT的作用是為了維持酵素催化的活性，防止酵素上的cysteine residues形成雙硫鍵，以保留與inhibitor反應的位點。