GPCR Signaling Assays

GloSensor^TM cAMP Assay
 
在細胞中表現含有cAMP結合位的inactive luciferase(pGloSensor^TM-20F cAMP)，與cAMP結合會活化luciferase，再加入試劑後產光。

特色

• 方法簡單: 「零」步驟分析，適用HTP或uHTP（3456-well）。
• 活細胞、Real-Time偵測：加入處理物後15分鐘偵測cAMP變化。
• 獲得更多數據結果：活細胞分析可得到kinetic data。
• 優異的分析品質：1536-well的Z’>0.8。

應用 

• Screen for allosteric modulators
• Profile Gs- and Gi-coupled receptors
• 特殊抗體設計，適於全程室溫操作。
• Assay pharmacology of compounds in live cells

試劑反應原理

cAMP-Glo Max^TM Assay

cAMP-Glo Max^TM Assay是一種均質的、利用冷光原理檢測細胞cAMP含量的高通量方法。若受試化合物能調節與Adenylate cyclase偶聯的G蛋白偶聯受體 (GPCR)，則會明顯地改變細胞內的cAMP。
此試劑能用於檢測細胞內的 cAMP 各種生化反應中的改變，如刺激物、抑制劑、及受試化合物對GPCR 的效應。檢測的原理是：Protein Kinase A (PKA)的活化反應過程會降低 ATP 含量，從而引起 冷光酶反應降低。

     cAMP-Glo Max^TM Assay將裂解緩衝液與 cAMP 反應試劑合二為一，成為 cAMP-Glo^TM ONE Buffer (cAMP-Glo^TM ONE 緩衝液 )。ONE Buffer以5倍濃度提供，為細胞培養液的起始體積提供更多的靈活性。

 cAMP-Glo^TM Max Assay 可在 96 - 1536 well plate中進行檢測。細胞加入化合物後，進行適當時間的誘導，再加入cAMP-Glo^TM ONE Buffer裂解細胞，活化的PKA會與PKA substrates反映並消耗ATP，然後加入Kinase-Glo® Reagent終止PKA反應，並用冷光酶反應檢測剩餘ATP。最後用盤式冷光儀讀取數據。冷光信號的半衰期超過4個小時，適用於HTS及批次實驗。

Phosphodiesterase (PDE) Assay
 
PDE-Glo^TM是設計於偵測純phosphodiesterase (PDE)酵素活性的長效冷光分析試劑。PDE會剪切GPCR活化時產生的cAMP和cGMP訊息，本產品可應用於cGMP-dependent PDE和cAMP-dependent PDE相關藥物的primary和secondary screening，或是kinetic experiment等等。