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Pull-Down and Two-Hybrid Systems

 


原理

HaloTag® Mammalian Pull-Down Systems

　HaloTag® Mammalian Pull-Down Systems為分離與鑑定在哺乳細胞中，目標蛋白與其具有交互作用細胞內的蛋白分析工具，利用HaloLinkTM Resin會與HaloTag®融合蛋白產生高特異性的共價建結特性，能快速及高效能的抓取蛋白複合物，也適用於表現量低的蛋白質。另外也提供HaloTag® Mammalian Pull-Down and Labeling系統，也提供多種螢光標記的ligand供客戶選用，適合應用在細胞定位，蛋白追蹤與蛋白轉移(protein turnover)分析實驗。

 

原理:
HaloTag®融和蛋白能短暫或是穩定表現在哺乳類細胞中，利用餌(bait)類似於釣魚方式抓取與目標蛋白具有交互作用的蛋白或蛋白複合物。細胞溶解後，與目標蛋白有交互作用的蛋白質會一起被HaloLinkTM Resin抓取，使用SDS緩衝液洗脫(或是使用denature緩衝溶液，像是8M的尿素)，也能使用TEV剪切蛋白酶洗脫。洗脫後的蛋白接著做後續的分析，例如西方墨點法和質譜儀分析。

 

特色:

  • 提升抓取能力:能快速以共價鍵結方式抓取HaloTag®蛋白，提升HaloLinkTM Resin抓取的能力
  • 相容性:相容於其他下游的分析方法，包含質譜儀分析
  • 能螢光標記融合蛋白:優化蛋白表現量，應用於蛋白質的定位

HaloLink™ Protein Array System

　HaloLink™ Protein Array System為一套檢測蛋白質與蛋白質、蛋白質與藥物和蛋白質與核酸之間交互作用簡易快速的方法。另外也提供HaloTag® Standard Protein供客戶選擇使用。 
   
　只需使用HaloTag® Vector，表現HaloTag®融合蛋白，將蛋白直接加在表面有包覆獨一無二的水凝膠HaloLink™ Slide(降低非專一性結合的機率)的well上，蛋白以共價鍵結方式固定在well上， 經過約1小時的培養，並可直接使用wash buffer進行清洗動作，降低背景訊號，接著進行後續分析實驗，操作十分簡單。

 

特色:

  • 蛋白抓取為不可逆反應:HaloLinkTM Slide藉由共價鍵與HaloTag®融合蛋白結合，達到抓取蛋白的目的。
  • 省去蛋白純化步驟:不論使用cell-free或cell-based蛋白表現系統，不需要純化蛋白即可做分析。
  • 降低非專一性結合的機率: HaloLinkTM Slide表面包覆獨一無二的水凝膠，大幅降低非專一性結合的機率
  • 允許直接清洗步驟:當HaloLinkTM Slide藉由共價鍵與HaloTag®融合蛋白結合後，能直接以wash buffer清洗slide，降低背景值，簡易又快速