克隆

IBA 提供一系列的超過180種具 有不同特點的表達載體。使用本系統，可以靈活的選擇將目的基因(GOI)直接克隆入選定的表達載體(Direct transfer cloning)或間接載 體 。通 過 將目的 基 因 同時亞克隆至不同的表達載體 中(Combinatorial cloning via pENTRY vector)，達到迅速和 標準化篩選的目的 。

超過180種不同表達載體

表達宿主

• 大腸桿菌
• 哺乳動物細胞
• 酵母
• 杆狀病毒(昆蟲細胞）

親和標籤

• Twin-Strep-tag®
• Strep-tag®II
• His-tag
• GST-tag
• Flag-tag

其他選擇

• 分泌信號
• 雙標籤
• 不同的大腸桿菌啟動子和抗生素抗性
• 克隆多個目的基因至同一表達載體

表達
MEXi 是 IBA 提供的哺乳動物細胞表達系統，可最佳化 Strep-tag®  蛋白的生產(無附加授權費用）。

MEXi 系統組成

• pDSG 系列載體
• MEXi HEK293E 細胞系
• MEXi 培養液（MEXi-CM）
• MEXi 轉染培養液（MEXi-TM）

MEXi 主要優點

• pDSG 是個小尺寸，具有 oriP 的附加型載體，能伴隨細胞分裂進行穩定複製
• 暫態表達，高性價比的蛋白質生產
• 多次傳代後，MEXi-293E細胞自始至終具有穩定的轉染效率
• 由EBV複製原點（oriP）和 EBNA-1 帶來的高蛋白表達量
• 表達培養基中含更少量的 biotin，可最佳化 Strep-tag® 的純化表現
• 使用 Strep-tag® 純化系統，蛋白純度大於95%
• Twin-Strep-tag® 適用於多種下游研究，如 SPR 分析

使用 Strep-tag® 和 His-tag 在哺乳動物細胞中生產目標蛋白
His-tag是目前被最廣泛使用的親和標籤，然而與 Strep-tag® 相比，在哺 乳動物細胞蛋白質生產時，效果卻不盡如人意。從哺乳動物細胞中純化 His-tag融合蛋白時，通常會伴隨非特異性背景蛋白的污染。其原因是宿主 細胞蛋白質中通常會伴有高比重的組氨酸殘基，與純化基質進行非特異性 的結合，並且與細胞培養基中的物質產生相互作用。此外，運用高濃度咪唑 溶液洗脫 His-tag 蛋白後，通常會對下游研究產生干擾。
反之，使用 Strep-tag®  純化時，僅用溫和的生理緩衝液，即可從哺乳類細胞 中得到純度大於95%的蛋白質。

BioLock
通常哺乳動物和昆蟲細胞培養基中，含有一定量的生物素（維生素 H）。 其可以作用於 Strep-Tactin®/Strep-Tactin®XT 的生物素結合位點，進而對 Strep-tag®II或Twin-Strep-tag® 融合蛋白與純化基質的結合造成影響。 因此，當目的蛋白是分泌至細胞培養基中時，預先在純化前加入適量的 BioLock 溶液來封閉生物素是十分重要的。

Wet Fred
使用簡易的 Wet Fred 工具，通過重力柱從大體積培養液中純化 Strep-tag®
融合蛋白。