【產品手冊｜2019 Genetic Reporter冷光手冊】

報導分析技術導論篇

一、什麼是報導基因分析技術呢?

二、報導基因

螢光:

綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)

紅色螢光蛋白(Red fluorescent protein, RFP)

藍色螢光蛋白(Blue fluorescent protein, BFP)

冷光:

細菌冷光酶(Bacterial luciferase,lux)

螢火蟲冷光酶(Firefly luciferase, luc)

珊瑚冷光酶(Renilla luciferase, Rluc)

深海刺蝦冷光酶(NanoLuc luciferase, Nluc)

冷光 vs 螢光二者不同處
1.螢光的發光原理是螢光蛋白接受特定波長的激發光(Excitation)在吸收能量後，會以長波長的放射光(Emission)將能量釋放，但往往激發光及放射光的光譜會部分重疊，導致偵測時無法區分，此外動物的自體螢光干擾會導致背景值過高，增加數據判讀的困難。
2. 冷光的發光原理是屬於化學反應，以冷光酵素催化受質後發光，但一般哺乳類不具內生性冷光酵素基因所以無自體冷光干擾，故背景質低、Signal-to-background高，此外冷光技術還具有非侵入性、操作簡單快速，且方便定量等優點。

註:螢光及冷光的發光原理

報導分析技術的實驗流程八大步驟

一、選擇載體
二、製備質體
三、細胞轉染
四、篩選Stable clone
五、選擇冷光檢測系統
六、In vivo:生物體細胞注射
七、注射In vivo grade冷光酵素受質
八、生物冷光成像IVIS

載體系列
一、pGL4 and pNL vectors
二、Coincidence Reporter Vectors
三、pmirGlo Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector
四、Monster GreenTM Fluorescent Protein phMGFP Plasmid

試劑系列

單冷光報導系統
1.螢火蟲冷光酶報導系統
2.螢火蟲冷光酶受質- D-luciferin及其衍生物
3.珊瑚蟲冷光酶報導系統
4.珊瑚冷光酶受質-Coeleterazine及其衍生物
5.刺蝦冷光酶冷光報導分析試劑

雙冷光報導系統
1.β-Gal冷光報導分析試劑

你知道ONE-GloTM、Bright-GloTM及Steady-Glo®之間有什麼不一樣嗎?
透過比較表格，讓你輕鬆馬上瞭解哦!

那不同的珊瑚蟲冷光酶有什麼不同呢?

我該選擇長效型還是短效型呢?
短效型-Dual-Luciferase® Reporter Assay System
長效型-Dual-GloTM Luciferase® Reporter Assay System

若需要分析大量的樣本，適合使用Dual-GloTM Reporter Assay System，試劑含有裂解細胞能力，且具有長效的冷光，不必擔心冷光衰退過快，可待96孔盤每一樣本皆加入試劑後再上機偵測。若實驗樣本數較少，則適合Dual-Luciferase® Reporter Assay System，使用Passive Lysis Buffer將細胞裂解後，以試劑進行偵測，具有強效冷光，分析線性廣，快速得到雙冷光數值！

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