【產品手冊｜IBA-細胞分選與擴增】

　　2019年9月台灣衛生福利部正式宣布修法開放「細胞治療」，不僅造福病人，也推動醫療生技的發展，而從事免疫細胞
相關的基礎研究，需要將研究的目標細胞從細胞群中分選出來，再視實驗設計將其進一步作In vitro cell expansion，IBA擁有多種細胞分選與擴增的試劑套組，包括手動與自動，磁珠與非磁珠等，其Positive selection與Label-free的分選與擴增方式，能將下游細胞實驗影響降到最低。

細胞分選與擴增的應用範疇

　＊基礎免疫研究　　　　　＊器官移植研究
　＊血液學、腫瘤學　　　　＊細胞/血液銀行
　＊自體免疫性疾病研究　　＊藥物與疫苗開發
　＊傳染病研究　　　　　　＊醫療研究 (例如：T細胞輸入療法)
　＊監控免疫狀態

IBA's cell selection & expansion portfolio
Non-Magnetic Cell Isolation
♦Fab-based Traceless Affinity Cell Selection (Fab-TACS®)
這項新技術利用細胞等級的瓊脂糖基質(Agarose matrix)，能直接選取來自全血樣本的細胞。
無需磁珠，非奈米珠(Nanobeads)，無需高親和力的抗體!
1.Manual cell selection-Fab-TACS®
IBA獨特的Strep-tag®/Strep-Tactin® system是一個創新Traceless Affinity Cell Selection (Fab-TACS®)細胞分選平台。Fab-TACS®是以正選方式(Positive selection)選取細胞，基於Immune affinity chromatography原理，使用CD-specific Fab-fragments辨認Target cells的表面受器，能可逆地抓取和釋放Target cells。使用Fab-TACS®平台，能選取Label-free, Non-activated的 Target cells，其結果再現性高，並適用於全血或其他種血液的樣本。

♦Fab-Strep fragments:
細胞製備最常遇到的問題是有限的細胞純度與回收率，這會影響細胞產品的品質與效力。使用正選的細胞分選方式，可以提高純度，但傳統法使用具有與目標細胞高親和力的抗體，造成不可逆的結合，即使目標細胞被分選下來，也會影響細胞原本的特性，例如: Cell stimulation與Cell receptor blockade。
為了解決細胞純度、回收率與維持細胞原本的特性，IBA開發創新的Fab-TACS®技術，無需抗體及磁珠，而是使用Fab-Strep進行可逆性的抓取及釋放目標細胞，Fab-Strep會從分選後的細胞自行分離，因此不影響目標細胞原本特性，利於下游實驗進行。

使用負選方式(Negative selection)的缺點:
負選方式是利用抗體去辨認非目標細胞，再使用磁珠方式將非目標細胞與目標細胞分離開來，由於試劑需要高親和力的抗體，高親和力的抗體會與Target cells產生Irreversible binding，造成Cell stimulation或Receptor blockade等不良影響，並有低純度跟低回收率的問題。

Magnetic Cell Isolation(Streptamer® Technology)
Streptamer®技術-使用可逆方式進行細胞分選、細胞擴增與細胞染色IBA的Streptamer®是一個能滿足科學家研Authentic non-modified cells強大的工具，其基於IBA特有的Strep-tag®技術，產品組合涵蓋不同階段細胞研究，包含細胞分選(Cell isolation)、細胞擴增(Cell expansion)與細胞染色(Cell staining)。

♦Streptamer® principle:
低親合性的Fab fragments或MHC molecules會特異性去辨認Target cell，為了實現對於目標細胞高親和力的結合能力，以利分選、擴增及染色實驗，Strep-tag®fragments會與多聚化(Multimerized)的Strep-Tactin®結合，加入低濃度的Biotin(Vitamin H)與Strep-tag®做競爭，由於Biotin對於Strep-Tactin®的結合力比Strep-tag®強，此時Strep-tag®會快速從Strep-Tactin®分離，爾後Fab或MHC-I fragments會自行從Target cell分離，完成細胞分選、擴增與染色的步驟。
這種可逆性搭配磁珠的細胞正選技術，能確實終止對細胞的刺激作用，並能搭配多種Strep-Tactin® fluorochromes進行細胞染色實驗。

1.Magnetic Cell Isolation-FAB Streptamer®
Fab Streptamer®細胞分選系統，能特異性辨認樣本來自PBMC目標細胞受體，或是細胞表面帶有Surface marker例如:CD3, CD4，應用於細胞分選與染色實驗。
►Fab Streptamer® technology(包含兩個部分):
Part1 融合於Twin-Strep-tag® (Fab-Strep)，低親和性的Fab
Part2 包覆於磁珠上面的Strep-Tactin® multimers

2.Detection of antigen-specific T cells with MHC I Streptamers®

►MHC I Streptamers® technology(包含兩個部分):
Part1 MHC I-Strep: MHC I molecule與Specific antigenic peptide融合於Twin-Strep-tag®
Part2 Strep-Tactin® multimers labeling fluorophore (PE或APC)或與磁珠結合

Cell Stimulation & Expansion(CD3/CD28)
IBA的細胞活化/擴增系統
體外產生大量功能性T細胞，對於基礎研究與探討疾病治療方式十分重要，IBA新型的Streptamers® T cell expansion試劑，能對Polyclonal T cells做擴增(Expansion)。

▲自然情形 ▲Streptamers® T細胞擴增系列

♦Streptamer® expansion technology
IBA Streptamers®是一個創新的T cell Polyclonal擴增技術:
藉由Strep-Tactin® multimer上的multimerization Anti-CD3 和 Anti-CD28 Fab-Streps soluble protein complexes與T細胞結合做細胞擴增。
•試劑的可逆性，能在任何時間點終止活化T細胞，只需將Biotin加到培養液中，因此可以精準的掌握細胞被活化的狀態。
•能根據實驗需求自行調整CD3:CD28 Fab-Strep的比例，或是參照Protocol建議的比例。
•使用Streptamer® CD3/CD28細胞擴增Premix，更能縮短實驗時間。

操作流程

IBA的Fab-TACS® technology與他牌的比較資訊