Genetic Reporter Vectors

pGL4 螢火蟲與珊瑚冷光酶報導載體

原理簡介
pGL4 Vector是第四代冷光酶報導基因載體，表現更強，反應更大更快速。新合成的luc2 (Photinus pyralis)和hRluc (Renilla reniformis)基因，使用哺乳動物細胞最佳化表現的codon，基因表現更強，可得到更大的反應倍數。報導基因和載體骨架(vector backbone)也去除了大部分consensus regulatory sequences，減少artificial表現的風險，結果更可靠。部份載體使用Rapid Response^TM technology，可使報導基因對treatment的反應更大更快速。本系列並提供為藥物篩選所設計結合Rapid ResponseTM 技術，含minP (TATA-box promoter)或含GPCR相關的CRE和NFAT-RE response element的載體，使您可更快篩選到更好的藥物。新一代的pGL4 vectors提供更佳的靈敏度，可信度以及更緊密的生理反應相關性，同時均適用多種Promega冷光酶分析試劑。由於本系列載體眾多，歡迎來電做詳盡的諮詢，讓我們幫助您選擇最適合的載體。

NanoLuc刺蝦冷光酶報導載體

NanoLuc冷光酶作用機制圖

原理簡介
NanoLuc^TM冷光酶來自深海蝦類Oplophorus gracilirostris，中文名稱為細角刺蝦，當細角刺蝦受到攻擊時，便會釋出冷光酶，發出藍色冷光以嚇退敵人，波長主要為460nm，野生型(wild-type)的細角刺蝦冷光酶分別由兩個19kDa以及兩個36kDa蛋白次單元(subunit)組成，與其他冷光酶並無相似的氨基酸序列，而催化冷光反應的蛋白次單元為19kDa為主。Promega將19kDa蛋白次單元做進一步胺基酸序列修飾，使其可穩定表現在哺乳類細胞中，命名為NanoLuc^TM冷光酶(Nluc)，冷光強度比起螢火蟲冷光酶(luc2)可增強80~230倍喔！是目前蛋白分子量最小，但發光最亮的冷光酶！

NanoLuc^TM冷光酶發光反應類似於珊瑚蟲冷光酶，單步驟，需有氧的環境下作用，不必消耗ATP，反應受質為furimazine (coelenterazine的類似物)，較coelenterazine穩定不易產生自發性冷光，擁有良好的signal to noise ratio。

Promega將野生型刺蝦冷光酶的密碼子進行修飾，使其更適合於哺乳類動物細胞中表現之外，冷光亮度、pH值耐受性也有所提升，在pH6~8的環境下皆可反應活化。NanoLuc^TM冷光酶不需要轉譯後修飾，蛋白結構不含雙硫鍵鍵結，且熱穩定性佳(Tm=60℃)，可因應較特殊的冷光反應條件。此外，NanoLuc^TM除了表現於細胞質中，也可分泌至細胞外，分泌型NanoLuc^TM冷光酶稱之為secNluc，secNluc產生後會被細胞運送至細胞膜外，在細胞培養液中可穩定存在，半生期為4天(37℃)，偵測冷光時，只需吸取少量的細胞培養液與冷光偵測試劑混和即可喔～相較於其他分泌型的冷光酶，NanoLuc^TM冷光酶分子量較小，且維持較長的冷光發光半生期，及超亮冷光強度，更有利於實驗的操作進行啦～

Signaling Vectors

Response Element pGL4 Vector均使用Rapid Response Technology和新一代螢火蟲冷光酶基因，「反應更強、倍數更大、表現更專一、少干擾」。內含Response element，transfection grade品質，可直接使用於實驗，方便又可靠。
目前有: 

• Stress Signaling Pathway包含「ARE、ATF6 ERSE、HRE、HSE、MRE、p53 RE、XRE」
• Cytokine Signaling Pathway包含「ISRE、SBE、SIE、STAT5 RE」
• Additional Signaling Pathway包含「AP1、CRE、NFAT-RE、NF-κB-RE、SRE、SRF-RE、TCF-LEF RE」

另外，還有搭配超亮的刺蝦冷光酶基因，帶有NF-κB Response Element 的NanoLuc® Reporter Vector，其他更多種類的客製化Signaling Pathway Vector如下表，請以原廠網站公告為主。

                     *多種冷光Signaling Pathway Vector