Cell Viability and Cytotoxicity Assays

Cytotoxicity Assays

           細胞實驗中，Cell Viability是檢測細胞生長狀態最直接的方式，但因為複雜的生物機制，Cell Viability下降並不一定代表Cytotoxicity上升，這樣的狀況常常讓研究人員無法利用單一種Data，來判斷實驗的結果，此時就需要Cytotoxicity Assays來使實驗設計更完整!

Cytotoxicity biomarker大多是細胞死亡後，因細胞膜破裂而將其釋放出來，所以選擇上也必須要考慮在細胞外環境的穩定度:

Multiplexing Assay

            多功分析(Multiplexing assay)，簡單來說，就是指在同一個Cell population或Well中分析兩種以上的參數!! 好處在於:

1. 將不明確實驗數據或誤判降到最低，增進對實驗的了解
2. 校正數據!讓同一樣品在不同檢測時，各種變數皆相同
3. 節省時間、細胞、medium及珍貴的test compound

多功分析大致可分為High content screening (HCS)及結合多種試劑的多功分析法兩種

• HCS利用精密的顯像設備來偵測培養孔中細胞的不同生理參數，可加入多種抗體、染劑、Fluorescent fusion partner等進行複雜的多功細胞分析，但不普及的主要原因是: 設備成本極昂貴、且批次分析效率較低、數據變異性高...等。
• 結合多種可相容的試劑，配合多功能Plate-reader，就可進行多功分析，此方式相較前者，可更方便操作、建立自動化、提高批次分析效率、降低數據變異性及成本，價格可親，故對於一般使用者的門檻較低。

Promega開發多種Cell health assays，除了試劑相容性極高外，以「加入、混合、讀值」簡單三步驟的操作原則，讓使用者能在不同試劑間相互搭配，以最方便的操作方式，滿足各種實驗需求。

多功分析試劑的搭配指南:

1. 確認實驗目的: 第一件事，就是決定在實驗終點所要了解的資訊，並選擇相對應且合適的Biomarker。
2. 容易使用: 確認要搭配的試劑在操作上的流暢度，例如均質分析系統，不需移除培養液、細胞清洗或離心…等步驟。且應該把試劑製備和分析反應所需的總時間長度考慮進去。
3. 偵測的靈敏度: 試劑的靈敏度會受到分析技術(吸光、螢光或冷光)、細胞種類及細胞數影響，試劑之間的靈敏度不建議相差太多。
4. 試劑穩定度:分析試劑必須在操作期間於室溫中穩定性高，且能配合讀取數據所需的時間。
5. 儀器: 實驗室中是否有多功能Plate-reader(吸光、螢光或冷光)可供使用。
6. 價格: 「價格」對每個研究人員而言均是重要的考慮因素。然而，當以價格作為考量時，在分析時需考慮的許多其他因素通常是被忽略的，像是時間、勞力、細胞培養成本，以及珍貴樣本數…等。

Promega產品的多功分析搭配範例:

Promega Multiplexing assay kit，為使用者需求而設計，不需要花心思搭配試劑，也不需要自行建立Protocol，可直接使用，增加實驗的可信度且更有效率。