原官網的常見問題都先搬到這分類底下

可以,P450-Glo的substrate皆為細胞滲透性,也可直接取培養液做檢測,細胞組織還可搭配下游裂解性試劑如CellTiter-GloR 3D(#G7570)做多功分析。

回覆:

        原本Kit中附的是將DNase I置於yellow buffer,M6101 RQ1比較適合抽完以後再進行treatment,建議RNA ready好之後再用M6101處裡。經M6101 處理之後,但若下游要進行RT-PCR,最後產物會含有濃度10mM MgSO4,鎂離子濃度太高會影響PCR的產率。如不能接受處裡完後,含高濃度的MgSO4,使用者可以在DNase digestion前先稀釋,或RNA樣本在RT-PCR前稀釋,或是RNA用酒精再沉澱一次 (比較不建議 會lose RNA),最後M6101 有stop solution 所以要加熱65度 去inactivate DNase。

回覆:

        建議使用產品所附之Resuspension buffer回溶Trypsin/Lys-C Mix, 至濃度1μg/μl(或以下),以25:1 protein:protease ratio(w/w) 比例使用。2種步驟1.Standard in-solution protein digestion  2.Two-step in-solution protein digestion 再開始之前做或不做Reduction and Alkylation都可以, 但在in-gel Protein digestion 是需要做Reduction and Alkylation步驟。

Increased Peptide and Protein Identifications Using a Standard Digestion Protocol

A6001 可適用 Roche light cycler 1.5,因機器可讀SYBR Green dye,而Promega的BRYT則是有similar excitation and emission profile in master mix 所以可行,另外儀器不需要執行passive reference normalization,所以不用再外加CXR dye.

可以,因為siRNA一般來說比DNA還要小很多, transfection的條件可以從1.5:1、2:1 ratio of Reagent to siRNA開始做優化。

High background:
1. 使用白盤。此試劑為螢光系統,建議使用黑盤,以降低螢光的 crosstalk及background。
2. Dead-cell number過多。可做 Dead-cell number curve,將細胞數控制在線性範圍內。

Low RFU:
1. Drugs/Compounds會嵌入DNA,與CellTox™ Green dye競爭結合位點。建議做compound or vehicle and CellTox™ Green Dye to untreated or Lysis Solution-treated cells 來比較相對的RFU。
2. 使用不適合讀質波長,The CellTox™ Green Dye is optimally excited at 512nm with a peak emission at 532nm.
3. Medium中的phenol red含量過高。建議做Medium only control。

Stop & Glo® Buffer在-20°C存放超過2個月後,可能會產生白色沉澱,此沉澱現象不會影響buffer效能。

使白色沉澱物消失方式為:

1. 4°C,4-8小時回溫。

2. 37°C,水域槽加熱15-20分鐘。 

Stop & Glo® Buffer在使用前建議震盪,幫助溶液混和均勻。

E.coli 及 B.cereus,這些屬於以下葡萄糖運送系統之物種:
1 .Glucose/H+ symporters
2. Permeases
3. Phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase (PEP) system

而有些細菌不使用2DG transporting system則無法用於Glucose Uptake-Glo™ Assay,如P.aeroginosa,其會在細胞外氧化葡萄糖。

根據Protocol標示,要選用波長為520 ± 20nm的設定,Citation中有使用螢光顯微鏡選用FITC濾片,也有使用Ex495/Em520的波長。

可以搭配其他螢光抗體做Immunofluorescence double staining,可將目標蛋白螢光抗體做染色後,再進行TUNEL assay。

(K)IV GGYTCAANSI PYQVSLNSGS HFCGGSLINSQWVVSAAHCYKSRIQVRLGEHNIDVLEGNE QFINAAKIIT HPNFNGNTLD NDIMLIKLSSPATLNSRVATVSLPRSCAAAGTECLISGWGNTKSSGSSYP SLLQCLKAPV LSDSSCKSSYPGQITGNMICVGFLEGGKDSCQGDSGGPVVCNGQLQGIVSWGYGCAQKNKPGVYTKVCNYVNWIQQTIAA N               

 http://www.uniprot.org/uniprot/P00761

當細胞受到IL-6(cytokine receptors) 或G-CSF(Groxth factor receptors) 兩種方式刺激後,都會造成STAT3 活化,但是活化的STAT3分別會結合上SIE 或 Human G-CSF 的response element,進一步調控基因的表現,因上游活化途徑不同,客戶須依研究目的來選擇。

使用Olympus LV200 bioluminescence microscope (Olympus)

回覆:

D-cysteine從-20度取出,解凍後後可能會產生白色結晶,可經由pipetting、vortex以及加熱到37度來溶解.

回覆:

 

Regeneration buffer的配方是10 mM NaOH pH值是11。
原廠有建議必須超過pH10, pH11比較保險。
但盡量保持在pH11,因為pH值太高,柱子上的streptactin XT會壞掉。

回覆:

Assay中附的Phosphate-Free Water經過QC以確保最低的background產生,如果要使用其他molecular grade water也可以,但是因為不能保證background產生的多寡,如果要使用其他來源的水,建議做水的control組以排除background值。