原官網的常見問題都先搬到這分類底下

回覆 ：LDH-Glo Reagent反應後可加入Stop Solution來停止反應並維持冷光訊號，配方為Menadione (Sigma Cat.# M5625) 10mM DMSO stock solution，final working concentration is 0.25mM。
根據總體積為100μl來計算(50μl sample + 50μl LDH Detection Reagent)，必須取2.5μl 的10mM DMSO stock solution，加進100μl 的Sample中，Final concentration才會是0.25mM。
(Protocol 5.Ｃ原本說要配成40mM DMSO stock solution，但這樣操作體積太小，建議改成上述做法)

Q ：網頁上寫最低為 0.01ng/µl，Protocol寫0.05ng/µl


回覆 ：取決於客戶儀器與標準品的配置，Dye最低偵測極限值為0.01ng/µl，根據protocol敘述,線性範圍為0.05-200ng / µl。

Q ：H2O2是已知的apoptosis inducer，使用此試劑時，是否為適當的poistive control，不影響試劑作用？


回覆 ：H2O2對RealTime-Glo Annexin V的影響，原廠建議優先選用非H2O2的compound作為Positive apoptosis inducer (i.e. staurosporine or actinomycin D)。
理由說明如下：
原廠曾測試過H2O2，當時使用的細胞株是HEK293，於72小時內沒有觀察到冷光與螢光訊號受到干擾。但因為H2O2相對較不穩定，Assay中常會另外加入一些stabilizer，而原廠並不確定這些stabilizer是否會影響到RealTime-Glo™ Annexin V 的Assay Chemistry。
如要自行測試H2O2條件，原廠提供一篇citation：Diverse Effects of Phospholipase A2 Receptor Expression on LNCaP and PC-3 Prostate Cancer Cell Growth in vitro and in vivo：作者用 100μM H2O2 作為Inducer，使用RealTime-Glo™ Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay做Time-course實驗 (data presented in Supplementary Figure 3)。

回覆 ：
此產品可分別測得：
1. total GSH： reduced form
2. GSSG：oxidized form
3. 用1/2可計算出GSH/GSSG ratio，用RLU或是經由STD curve換算後的濃度皆可，公式請看protoocl(注意2GSH=1GSSG)
當Oxidative stress上升，total GSH不變，GSSG會變多，GSH/GSSG ratio變小

回覆 ： GoTaq® Master Mixes (Cat. #M7122)無法使用在Fast cycling protocol，因此沒有佐證數據及資料可以提供給客戶，如果要使用Fast cycling protocol，則要選擇GoTaq® G2 Hot Start Taq Polymerase (Cat. #M7401)或是GoTaq® G2 Hot Start Master Mixes (Cat. #M7422)。

除了M7122不能用Fast protocol之外，連GoTaq® G2 DNA Polymerase (Cat. #M7841)也不能用在Fast Cycling，所以更不用說GoTaq® DNA Polymerase (Cat. #M3001) 跟GoTaq® Master Mixes (Cat. #M7122)想用在Fast Cycling了。(比較快的記法是"是G2&hotstart"才可用在Fast cycling！)

如果比較介意PCR整體時間，想要快一點的話，可建議購買GoTaq® G2 Hot Start Master Mixes (Cat. #M7422)

回覆 ：有文獻做此應用，方法是合成The yeast codon optimized version of the NanoLuc-PEST luciferase (yNLucP)，先插進Yeast expression plasmid再放到Yeast上表現，下游可用Nano-Glo reagent。
(參考資料：http://www.diva-portal.org/smash/record.jsf?pid=diva2%3A936671&dswid=-4577)

回覆 ：有，原廠測試過樣本為IgGs在 50mM Tris pH 7.5 與sodium phosphate pH 6.6 Buffer下切醣，效果比在ammonium bicarbonate好。

回覆 ：有一篇Promega article與Reference 
Pubhub article: Recombinant PNGase F for Glycoprotein Analysis
Publication: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0184968

回覆 ：蛋白立體結構障礙，或是有些醣本身比較難去除，有幾點可以改善PNGase F的切醣效力，例如：增加酵素量、反應時間、加ProteaseMAX™ Surfactant、使用其他protease(e.g.Trypsin,V5280)先將蛋白切成peptides，會比intact proteins切醣更容易。

回覆 ：依原廠經驗，可保存在4℃一週。

Q ：Human MSP1D1 Protein, His Tag (Nanodisc)用途？


MSP1D1 是膜支架蛋白，會包覆CD20 nanodisc 增加整個穩定性， 可以維持生物學性跟較佳的水溶性 nanodisc已經獲得專利，在生物藥開發的公司可以放心使用，MSP1D1 是empty nanodisc, 一般是與CD20的nanodisc蛋白 CD0-H52H1一起使用 並作為isotype control。如果是FACS的客戶會使用到，MSP1D1蛋白(APO-H51H3)看來是用來排除骨架蛋白(scaffold protein)的non-specific，但也不是必需，要看客戶的需要，如果有的客戶會擔心得到的signal不是來自CD20的話，應該可以用空的Nanodisc去排除作驗證。"RC317 cells: 293 cells overexpressing anti-CD20-scFv CAR".