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原官網的常見問題都先搬到這分類底下
回覆:
沒有指定哦，一般1.5ml Microcentrifuge Tube皆可，但需儘量避免彩色的or盡量不要霧面的。
回覆:
其產品是用於稀釋Transfected DNA但維持Total DAN濃度。
回覆:
參考Frozen形式是配製成 0.5 ± 0.05mg/ml,使用 protease:protein ratio of 1:100 to 1:20 (w/w)剪切,當然也能依自行的需求而自行調整。
回覆:
原廠Protocol沒有特別指定要用哪一種,通常Promega的plasmid是用JM109來做培養的,因此除非protocol有特別註明,所以一般並無限制哦。
回覆:
就是它==MAP1LC3B
Q:傳性基因/可能有二級結構及50-60% GC-rich with Low yield or no yield in amplification
回覆:一般可朝以下幾點著手:
1. Adjust annealing temperature，這邊提供一個Promega的連結可做melting temperature for primers in the GoTaq® reaction.
2. Minimize the effect of amplification inhibitors. Reduce the volume of template DNA in reaction or dilute template DNA prior to adding to reaction. Diluting samples even 1:10,000 has been shown to be effective in improving results, depending on initial DNA concentration.
3. Increase template DNA purity. Ex. Include an ethanol precipitation and wash step prior to amplification to remove inhibitors that copurify with the DNA.
4. Add adjuvant(PCR enhancing agents) (e.g., DMSO or betaine) may improve yields.最終濃度約5%。
General stabilizing agents such as BSA (Sigma Cat.# A7030; final concentration 0.16mg/ml) also may help to overcome amplification failure.最終濃度可調整範圍落在0.1-0.8ug/ul。
PS. GoTaq® Green Master Mix和DMSO, betaine相容，這些添加物不會造成GoTaq顏色改變或是影響dye migration."
Q:MSI kit 裡面的k562DNA 是拿來做control 用? 如果要推MDx DNA Polymerase 是D6001有Hot start ?還是D4001，且要用MSI kit 裡的gold star 10X buffer ？
回覆:是的, positive amplification control. 推D6001/HotStart，直接使用MSI Kit內的10X buffer。
Q:假設細胞在ATCC or DSMZ database比對不到,那要如何去定義這個細胞呢?
回覆:
可以先確認細胞來源,通常此細胞大多是屬於Primary culture cell, 所以database不一定有, 但可以藉由細胞鑑定做side by side比較, 確認細胞有無汙染，不過也需要額外找其它Marker 證明細胞的種類哦。
Q:如果細胞經ATCC or DSMZ database比對結果與送的細胞名稱不符,但比對結果為80%以上,要怎麼解釋?
回覆:
因為我們無法定義你的細胞種類,只能依照結果來敘述並說明利用資料庫比對的結果,此株細胞與送件的細胞有最高的%值,但也無法直接證明送件的細胞被比對的細胞汙染,所以也只能說對到的細胞株與送件的細胞株不符。
Q ：為什麼CoA用A260 / A250表示吸收率？
回覆 ：
因為傳統上DNA是使用苯酚/氯仿提取法純化的。 測量250nm處的吸光度以檢查苯酚污染。 Promega製造程序已更新為使用更安全的方法，但A260 / A250的質量控制規範仍為1.05或更高。
Q ：根據CoA，G1521已被檢測為HIV和HBV表面抗原陰性，該來源是否已被檢測為C型肝炎抗原和人乳頭瘤病毒（HPV）？
回覆 ：
儘管來源是健康個體，但我們僅測試HIV抗體和乙型肝炎表面抗原，並且只通過此測試來保證。 原廠沒有測試Hep C抗原和HPV。請注意，這些DNA是從21歲-65歲之間的匿名捐贈者（至少6名）的血液中提取的. 由於獻血者是匿名的，因此無法知道同一個人是否多次獻血。 我們希望該產品中存在的供體DNA在每個批次中都會有所不同。
Q ：針對nanopore sequencing是使用Ligation or Rapid kit?
回覆 ：是ligation。
回覆 ：不行。此vector適用在E.coli或一些Gram negative bacteria表現蛋白, 如果要在革蘭氏陽性菌表現蛋白，需要有 origin of replication for plasmid replication (in order for the POI to be expressed)。
Q ：蝙蝠糞便樣本要抽取RNA，且樣本保存在RNA later當中的話是否可以適用AS1330?
回覆 ：否。會建議使用Maxwell® RSC simplyRNA Tissue Kit (Cat. #AS1340)。
(可參考Promega官網Applications note ：標題是RNA Purification from human feces)
Q ：想使用Promega In Vitro Transcription kit做具有PTM的RNA(包含Poly(A)+ tails, 5´-caps, 5´-untranslated & 3´-untranslated regions)、下游是要打進老鼠體內做蛋白用、詢問產品搭配組合？
回覆 ：由於是要打到老鼠體內做In Vivo translation，因此要用RiboMAX Large Scale這套；產生帶有poly A的mRNA，需搭配pSP64 Poly(A) Vector使用。
所需產品清單如下 ：
• pSP64 Poly(A) Vector (Cat. #P1241)
• Primers to check sequence of cloned insert - pUC/M13 Reverse Primer (Cat. #Q5421) or the SP6 Promoter Primer (Cat. #Q5011)
• Plasmid extraction kit - Wizard® Plus SV Minipreps System (Cat. #A1470)
• Restriction enzymes (for cloning desired sequence and linearising vector prior to in vitro transcription)
• Clean-up linearised DNA - Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System (Cat. #A9281) OR Wizard® DNA Clean-Up System (Cat. #A7280)
• SP6 RiboMAX™ Large Scale RNA Production Systems (Cat. #P1280)
• Ribo m7G Cap Analog (Cat. #P1711)