【產品手冊｜IBA-FAB TACS外泌體分離純化】

細胞外囊泡（EXTRACELLULAR VESICLES，EVS)
　　外泌體(Exosomes)膜性囊泡結構,起源於內體(Endosomal),可以被不同種類的細胞分泌,參與多種生理學和病理學反應。其直徑在30-150nm之間,是最小的細胞外囊泡。外泌體含有的表面蛋白部分源自於在胞吞過程中的細胞質膜,其特有的四跨膜蛋白超家族蛋白被認為是外泌體的標誌蛋白,如CD9, CD63和CD81。通過運輸特定的生物分子,如DNA,RNA, 蛋白質,酶和脂質,外泌體成為細胞間交流的載體。這種通過細胞間囊泡運輸進行細胞間的交流,在人類健康與疾病,包含發育, 免疫,組織動態平衡,癌症,和神經退行性疾病中,發揮著重要作用。

外泌體特徵:
1.直徑在30-150nm
2.小於凋亡小體和微泡
3.表面含有四跨膜蛋白 CD9, CD81和CD63
4.介導細胞間通訊
5.在多種疾病模型中作為治療靶點

無痕親和分選(TRACELESS AFFINITY SELECTION)
以Fab為基礎的無痕親和分選技術 ( Fab-TACS ) ,無需使用磁珠,即可利用親和層析系統進行外泌體的分離。其原理是利用Twin-Strep-tag 標籤的CD-特異性Fab 片段 (Fabs)進行可逆的結合和釋放外泌體。適用的樣品來源覆蓋細胞培養上清液,血清,和血漿,可分離得到label-free, 且含有完整生物學功能的外泌體。從而實現純化流程簡便,高品質,且具高可重複性的外泌體分離純化,為外泌體研究添磚加瓦。

試劑盒特點
1. 外泌體純度高達99%
2.純化步驟簡便,快速
3.適用多種樣本來源
4.無需使用抗體與磁珠
5.低雜質污染
6. 容量:5x10¹⁰ particles/ml
7. 分離試劑可逆

高品質外泌體分離技術

♦有效降低其他細胞外囊泡雜質污染
粒徑檢測是鑒定分離到的外泌體的關鍵方法之一。從間質幹細胞(MSCs)培養上清液中分離的到直徑範圍為30-150nm的顆粒,驗證萃取到大量的外泌體( A )。相較而言,使用其他牌PEGylation試劑盒,萃取出的的符合的外泌體大小的顆粒僅為32% (B) ,其中混雜了其他較大的細胞外囊泡。
♦高外泌體標誌蛋白含量
如果分離得到的樣品中有其他與外泌體大小相同的雜質,則會對純度產生影響。因此,對使用Fab-TACS®技術從間充質幹細胞 ( MSCs ) 培養上清液中分離的外泌體,使用西方點墨法(Western blot)進行鑑定的標誌蛋白:CD63和Alix。經檢測,兩種蛋白均在純化得到的顆粒中(C) , 驗證了分離到的顆粒為外泌體。
♦實驗結果可重複性
細胞培養上清液的組成由於MSC供體樣本的不同而有所差異。因此測試來自不同MSC供體樣本進行三次獨立實驗,純化后的外泌體平均粒徑再86nm至90nm之間。三次分離得到的顆粒中,有94%的顆粒直徑30- 150nm之間 ( D )。因此,Fab-TACS技術不僅可以分離得到高純度的外泌體,此方法還具有良好的可重複性。
♦適用多種來源樣本的擷取
體液如血液和尿液,也是外泌體的重要來源。與從細胞培養基上清液中的分離相似,96%的顆粒從人血清中被分離,大小在30至150nm之間 ( E )。

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