Methylation Analysis

Bisulfite Conversion原理

MethylEdge® Bisulfite Conversion System

        進行DNA甲基化分析最常使用的方式是，利用亞硫酸鹽轉換(Bisulfite conversion)，將DNA上的胞嘧啶(Cytosine, C)轉變為尿嘧啶(Uracil, U)，但如果DNA序列上的Cytosine是有甲基化的，則不會改變。下游再利用PCR技術做放大，即可的到不同的DNA序列(如上圖)，MethylEdge® Bisulfite Conversion System能夠在2小時內，從多種來源樣本中，進行Bisulfite Conversion及DNA purification，簡單化的步驟，減少過程中DNA片段化產生，保持 DNA 完整性。

  MTase-Glo™ Methylation Assay

        用於檢測甲基轉移酶活性的冷光試劑，其原理是，利用甲基轉移酶反應過程中，會將SAM消耗，變成SAH，再利用MTase-Glo™ Reagent將SAH轉變成ADP，接著與Detection Solution反應產生冷光，冷光訊號與甲基轉移酶活性成正比。

MTase-Glo™作用原理

        生物中存在各種甲基轉移酶，其作用是將甲基從Donor上轉移到像是Peptides、Histones及Oligonucleotides…等Accepter上，而甲基Donor就是SAM。此套試劑屬於通用型試劑，只要是可將SAM上的甲基轉移到Accepter上的甲基轉移酶，皆可使用此產品來檢測酶的活性。

  MTase-Glo™操作簡單，利用靈敏的冷光訊號，適用於高通量的篩選實驗及藥物開發。

Succinate-Glo™ JmjC Demethylase/Hydroxylase Assay

        Demethylation/hydroxylation reactions參與許多重要的生物過程，如蛋白質的轉譯後修飾、DNA / RNA修復、代謝…等。

        Succinate-Glo™用於檢測demethylase/dioxygenase(去甲基酶/雙加氧酶)活性的冷光試劑。其原理與MTase-Glo™ Methylation Assay相似，demethylase/ dioxygenase在反應過程中會產生琥珀酸(Succinate)，Succinate經由Succinate Detection Reagent I 轉變成ATP，再加入Succinate Detection Reagent II產生冷光。

Succinate-Glo™原理

Succinate-Glo™提供靈敏的冷光訊號，對於高通量的篩選實驗及藥物開發提供更好的檢測方式。

PCR

        甲基化研究在表觀遺傳學中是不可或缺的一門學問，對於DNA上的甲基化程度，可利用MS-PCR (Methylation-Specific PCR)的方式，或是用限制酶判斷甲基化與否的 MSAP方法 (methylation-sensitive amplification polymorphism)。

相關限制酶請參考原廠網站:

https://www.promega.com/products/epigenetics/methylation-analysis/