【勁報第50期｜Inflammatory-紅腫熱痛的背後】

在紅熱腫痛發生時，可以透過試劑針對特定Marker進行檢測，發炎反應Inflammasome的研究已經行之有年了，也簡單分為四大類：NLRP1b、NLRP3、Naip/NLRC4、AIM2，而其中NLRP3會被多種分子及病原體活化(DAMP&PAMP)，近期也被提出與代謝疾病與慢性發炎有關，因此最受研究學者的關注。本篇以Cytokine release、eATP、Caspase-1等新的技術及產品做為主內容。

►當Inflammasome形成後會剪切Inactive procaspase-1，產生活化的Cysteine-protease enzyme，也就是Caspase-1，接著刺激細胞內Proinflammatory cytokinase：Interleukins IL-1β and IL-18的產生。同時，Caspase-1也參與Pyroptosis(焦亡)這個由發炎導致的細胞死亡機制。

◖Lumit™ Cytokine Immunoassays◗
Lumit™ Immunoassays是以NanoLuc® Binary Technology(NanoBiT®)為基礎，將抗體分別標記LgBiT與SmBiT，在分析樣本的存在的情形下，抗體會去辨認目標勿而接近，此時LgBiT與SmBiT會結合成為具有活性的NanoBiT Luciferase，加入Substrate後會產生冷光訊號。
 

Lumit™ IL-1B Immunoassays

Lumit™ cytokine related product

Lumit™ HMGB1 Immunoassays
 

►利用Promega NanoBiT技術，利用抗體方式，可以偵測內生性蛋白的變化，並可以取代傳統western blotting及ELISA技術，提供高靈敏度冷光系統並不需要wash step，減少操作時間及步驟，內容並將與其他類似免疫偵測進行表格比較：



 

◖Extracellular ATP assay◗
業界首創可檢測Extracellular ATP(eATP)專用的Live-Cell Kinetic Assay冷光試劑，克服了以往eATP在細胞外的穩定度差且不易偵測的問題。


►eATP檢測可以在不破壞細胞的狀況下，檢測medium中ATP release的量，可以作為ICD的檢測Marker，另外也可以協助需要偵測medium中的ATP，取代傳統使用Celltiter-Glo Modified protocol的麻煩，且可以進行Real-time assay可以提供更多的實驗設計可能性。



 

◖Caspase-Glo® 1 Inflammasome assay◗
細胞呈現發炎狀態，可看作是Pyroptosis的特徵，Caspase-1活化，形成Inflammasome，並伴有大量促發炎因子IL-1β、IL-18的釋放。細胞發炎的檢測方式，常用Caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-18 cytokine及ASC蛋白作為指標，可進行Western Blots、ELISAs或是螢光檢測方式來進行實驗。


►Caspase-1一直都是發炎反應的主要Marker，但傳統的分析方式容易因caspase 3/7而造成背景值，Caspase-Glo 1 提供抑制劑，移除其他caspase造成的背景值。